實驗室微生物實驗必知的培養製備技術匯總

　　一、要樹立科（kē）學必須真實的觀念，實驗態度要端正（zhèng）。

　　要懷著一顆為了出具真實（shí）、準確，可信數據而敬畏的心去申請能（néng）力驗證。

　　實驗（yàn）要求科學嚴謹,實驗要預（yù）先充分練（liàn）習和實踐。能力驗（yàn）證是對（duì）實驗室綜（zōng）合實驗水（shuǐ）平（人員，設（shè）備，環境等多因素）的評價。

　　首先要選好實驗項（xiàng）目，找到與之配套的方法，進（jìn）行充分的方法驗證，從檢測（cè）員能力，儀器設備性能，校檢結果是否能（néng）滿足實驗需要（yào），實驗檢測多次實驗，檢測環（huán）境是否進行了充（chōng）分（fèn）的考慮，實驗確認好實驗項目，認真學習標（biāo）準，理解標準，並做到（dào）標準所規範的步驟，並對自（zì）己實驗有了一定的信心後再去申請能力驗證為宜。

　　舉例：某實驗室未經過充分實驗方法（fǎ）確認，實驗平時做的（de）也少，直接申請了能力驗證。實驗過程生疏，照方抓藥，手忙腳亂（luàn），造成稀釋梯度不夠，平板幹（gàn）燥，菌落蔓延，無法出具具體數（shù）值，實驗失敗。

　　二、實（shí）驗室收到（dào）盲樣菌株標本後，首先應做的事情利用集菌儀或者微生物檢查儀製（zhì）備樣品。

　　1、檢查標（biāo）本的性狀和確認包裝（zhuāng）情況，然後按照（zhào）要求去能力驗（yàn）證網站提交收到樣品情況。

　　2、仔細閱（yuè）讀參指導書，包括標（biāo）本如何保存的（de）信息，進行實驗室內部工作分（fèn）配，明確工（gōng）作任務和要求。

　　3、實（shí）驗（yàn）前（qián）應嚴格按照作業指導書的要求製訂檢驗流程，認真做好準備工作，包括實驗中需要使（shǐ）用的器皿，須提前做（zuò）好清潔滅菌。

　　三、能力驗證（zhèng）樣品處理。

　　1、定量項目，西林瓶內（nèi）樣品不可分割，應全部用於檢測。一般參考書指導的是加40mL稀釋液製成40mL樣品。

　　2、定量項目樣品稀釋。指導書（shū）標明了稀釋範圍（wéi）的，在稀釋範圍左右各加1個稀釋度進行；書上沒有稀釋範圍的，多做稀釋倍數，選擇合（hé）適的稀釋倍數計數（一般可稀釋至10-8）。

　　3、定量項（xiàng）目（mù），除了要多做稀釋（shì）倍數外，同時同一稀釋度要多倒幾皿，從原理上來講，檢測過程屬於隨機抽樣檢查，平（píng）板越多，數據越接近真（zhēn）值（zhí）。考慮性價比，又不可能一直瘋狂一個稀（xī）釋度很多平板，所以能力（lì）驗證時候多倒幾（jǐ）皿，求好結果。

　　4、定性項目有一些（xiē）重要步驟。

　　a、增菌及分離步驟尤其重要。選（xuǎn）擇（zé）合適的增（zēng）菌液和分離用培養（yǎng）基對目標菌的檢出非常關鍵，選擇（zé）兩種以上的增菌液和分離用培養基對菌株作直接分離和增菌後分離。

　　b、劃線分離十分重（chóng）要，要把增菌液中的目標菌盡量多的表達出來，要分出（chū）單個菌落並盡可能多挑取可疑菌（jun1）落，確保分離到目標菌。

　　c、生化試（shì）驗和血清學試驗以營養瓊脂平板上的純培養細菌為好。

　　四、實驗過程一定要做（zuò）陰陽對照，全程（chéng）空白對照。

　　再厲害的高手也有失（shī）手和看走（zǒu）眼的時候，所以陰陽（yáng）對照就是一麵鏡子。對於一些熒光染色後（hòu）進（jìn）行判讀的實驗顯得尤為重（chóng）要。

　　這裏掃盲一個誤區，定量計數測（cè）菌數時，麻豆免费视频會認為空白就（jiù）是直接取1mL無（wú）菌水然後加入（rù）到平（píng）板裏，然後混菌倒皿，這是錯誤的。因為這樣做的話，隻能模擬證明稀釋後倒平板這一步有沒有（yǒu）汙染。而無法證明從樣品稱取-樣品稀釋時候的汙染質控情況。所以要做全程空白對照。

　　全（quán）程空白的含義就是把無菌液當（dāng）成樣品，然後走一遍實驗（yàn）過程。如果嚴格（gé）這麽做（zuò）的話，又會走向另一個極端（duān），所以全程空白隻從取樣開始（shǐ）至稀釋（shì）10-1做了簡化，而不做後續稀釋空白（bái）樣的（de）混菌實驗。

　　在有些其他實驗時候，會有樣品空白以（yǐ）及稀（xī）釋液空白，比如（rú）大氣環境NOx和SO2的檢測，有興趣（qù）的可以（yǐ）去看看，對於全程空（kōng）白的意義理解有更好的幫助。

　　五、培養基方（fāng）麵需要注意的地方。

　　1、培養基配製（zhì）充分混勻後（hòu）再滅菌。

　　正（zhèng）確做法是用一（yī）部分水攪拌均勻後（hòu），再加入剩餘水（shuǐ）量（liàng），混勻後滅菌或分裝。

　　2、混菌法倒皿要充分混勻。

　　培養基倒完要左5圈右（yòu）5圈（混勻速度（dù）一定要慢，目的是——避免培養基波動到二皿接觸的縫隙部分造成後續汙染），找（zhǎo）較水平位置冷卻（què）凝固。

　　3、微生物限度過濾結束後培養基要不要覆蓋問題。

　　覆蓋的目的是為了阻止活菌在培養基表層通過（guò）鞭毛移動，造成片狀生長，無法計數（shù）這一不利現象的發生。這裏可以（yǐ）發揮主觀能（néng）動性-對於不運動的菌，可（kě）以不覆蓋，對於運動的菌覆蓋。

　　總結一下：

　　a長期檢測同一（yī）種樣品，不覆蓋並（bìng）無蔓延現象，不覆蓋；長期檢測（cè）蔓（màn）延選擇了覆蓋，一直覆蓋。

　　b未知樣品，進行（háng）覆蓋和不覆（fù）蓋的比對實驗，然後決（jué）定以後同樣的樣品是否需要覆蓋。養成經驗。

　　c能力驗證實驗（yàn），覆蓋和不覆蓋的都做，不要吝惜（xī）那麽一（yī）點點培養基或耗材，畢竟能力驗證實驗做的漂亮才是實驗室（shì）（是室而不是人！）能力的綜合體現。

　　4、培養過程防止平皿幹燥。

　　培養過程中培養基可以倒（dǎo）的適當厚一些，比如25mL。培養箱底部接一個不鏽鋼盆，裝上足量無菌（jun1）水（沒有就去買幾（jǐ）瓶什麽的水倒裏麵）。

　　5、培養完成要保留實驗平（píng）皿和其他相關（guān）材料。

　　作為能力驗證，原始記錄及（jí）實驗報告還沒出具完成，各種材料還是保留至數據出具後較好，便於出現問題現（xiàn）查原因，馬上（shàng）補救。

　　題外話：很多（duō）檢測員等結果出了問題然後（hòu）到網絡上來（lái）求救，結果一問平皿已經洗掉（diào）了（le），那就不知道是什麽狀況了。有時候你問她她還會（huì）振振有詞（cí）的講：10-1，10-2都蔓延了，不洗掉幹嘛，10-5，10-6沒長菌，不洗掉幹嘛？我當時真的無語，也不想多說（shuō）話（huà）就沒繼續講了。現在我回答一下這（zhè）個問題：我要你一套完整梯度濃度（dù）的平（píng）皿，可以看出你10倍稀釋梯度是不是穩定，還有蔓延是個什麽狀況，到（dào）底有多少，是一（yī）片還是局部還是很小一部分（fèn），然後根據整體數據估算結（jié）果（當然實驗做成這樣也基本算失敗了，因為實驗沒有做到你可控的範圍），是補救（jiù）的一種（並不可取，屬於垂死掙紮）。定量實驗時，當天做（zuò）完的稀釋樣品也要放冰箱裏，雖然（rán）實驗要求不能複檢或重複檢測，但作為微生物專業你是知道菌放在2-8℃下（xià）並不會長多少，如果第二天一看數據有蔓延或疑問，馬上再做（zuò）一次，這樣（yàng）也應該在誤差範圍內出數。

　　6、實驗培養（yǎng）過程勤觀察（chá）。

　　微生（shēng）物培養過程一（yī）般需要幾小時到幾十小時，要利用這段時（shí）間（jiān）觀察（chá）培養箱及菌生長情（qíng）況（kuàng），比如溫度是否穩定，培養室內濕度如何等等，多思多看，準備預案。方有可能得到與盲樣一致的（de）實驗結（jié）果。

　　原始記錄應有條理（lǐ）、思路清晰（xī）,完整準確地記錄菌株鑒定檢驗的全過程,原始記錄要（yào）包含時（shí）間、試驗現象、試驗結果三個要素，方便試驗出現問題的查找。